近年来，随着环保要求的提高和抗生素使用的限制，基于微生态的新一代益生菌产品发展迅速，正在形成一个产业。然而，市场上许多益生菌产品的质量仍然不稳定，生产处于复合和模仿阶段，测试方法也并不完美。很多益生菌产品的标准和测试方法也令人困惑。此外优秀的检测人员不足，这也使得市场上的益生菌产品检测变得困难。因此，我们将简要讨论益生菌的检测方法，希望以此更好地改善益生菌质量检测市场。

一、益生菌检测成长测量方法

通过测量一定体积培养溶液中所含的菌丝量来反映微生物的生长。该方法是在分级离心管中取一定量的待测培养液（例如10 mL），设定一定的离心时间（如5 min）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清液。当上清液体积测量为v时，菌丝体浓度为（10-v）/10。菌丝体浓度测定是大规模工业发酵生产中微生物生长的重要监测指标。该方法相对简单，简单，快速，但需要设置一致的处理条件，否则偏差非常大，并且由于在离心沉积物中包含一些固体营养素会有一些偏差。 

二、益生菌检测称重方法

可以通过离心或过滤来确定。通常干重为湿重的10-20％。在离心方法中，将一定体积的待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，离心，用水洗涤1-5次，并干燥。干燥可在105℃或100℃的烘箱中干燥或在红外光下干燥。如果使用过滤方法，可以用滤纸过滤丝状真菌，并用过滤膜如醋酸纤维素膜过滤细菌，过滤，用少量水洗涤，并在400℃真空干燥。 ℃。干重法更麻烦。当获得的微生物产品通常是细菌细胞时，经常使用该方法，例如活性干酵母（ADY）。

三、益生菌检测浊度法

微生物的生长导致培养物的浊度增加。通过紫外分光光度计测量特定波长下的吸光度，以判断微生物的生长状态。当定时培养细胞的生长时，可以使用带有侧臂的特殊三角烧瓶。通过将侧臂插入光电色度计的比色孔中，可以在任何时间测量生长而不必服用细菌溶液。该方法主要用于监测发酵工业中细菌细胞的生长。例如，我使用UNICO的紫外 - 可见分光光度计测量发酵液的吸光度OD600，其中比色管的波长为600nm。  

四、益生菌检测染色计数法

为了弥补油镜下的一些微生物不易观察计数，而直接用血细胞计数板法无法区分死细胞和活细胞，人们就发明了染色法。通过不同染料对细胞进行适当染色，可以更容易地在显微镜下对活细菌进行计数。例如，酵母的活细胞计数可以用亚甲蓝染色，染色后，在显微镜下观察，活细胞是无色的，而死细胞是蓝色的。 

五、益生菌检测血细胞计数板法

血细胞计数板是一种厚的玻璃片，具有特殊的结构尺度和厚度。玻璃板有四个凹槽和两个钹。该中心有一个短横向沟槽和两个平台。两个平台的表面高0.1mm。每个平台都刻有不同规格的网格。中央0.1 mm2区域刻有400个小方块。通过观察油显微镜，可以计算大细胞中的微生物数量，并且可以计算1mL细菌溶液中包含的细胞数量。该方法简单，直观，快速，但仅适用于在单细胞状态下对微生物或丝状微生物产生的孢子进行计数，结果是包括死细胞在内的细菌总数。 

六、益生菌检测比例计数法

将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）的液体与待测细胞浓度的细菌液均匀混合，并计算显微镜视野中各自的数字，即未知细菌溶液的细胞浓度可以获得。该计数方法相对广泛，需要配制已知颗粒浓度的悬浮液作为标准。 

七、益生菌检测液体稀释法连续

10倍连续稀释未知细菌样品，根据估计数量，从最合适的3个连续10倍稀释液中取5mL样品，接种1mL至3组在15包培养液的试管中，记录数量培养后在每个稀释液中生长的管子，然后检查表格的最大数量以获得样品中的细菌数量，并根据样品的稀释因子计算。活细菌含量。该方法通常用于检测食品中的微生物，例如饮用水和牛奶的微生物限度测试。 

八、益生菌检测平板菌落计数法

这是最常用的活菌计数方法之一。将待测细菌液体进行梯度稀释，并在固化前将一定体积的稀释细菌液体与合适的固体培养基均匀混合，或将细菌液体施加到固化的固体培养基平板上。孵育后，原始细菌溶液中的细菌数量可以通过将细菌溶液的稀释度乘以板上出现的菌落数来计算。通常优选在直径为9cm的平板上具有50-500个菌落。然而，该方法很麻烦并且操作员需要熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以获得细菌液中含有细菌的细菌，还可以同时分离培养细菌液中的细菌，得到单克隆抗体。 

九 、益生菌检测试剂纸方法

在平板计数法的基础上，开发了小型商品，用于快速计数，以小厚滤纸，琼脂板等形式。将合适的培养基吸入滤纸和琼脂片中，加入活性指示剂2,3,5-三苯基四唑氯化物（TTC，无色），并在测试细菌液体后，放置密封包装。文化袋。短期培养后，在滤纸上出现一定浓度的玫瑰色微结肠，并与标准纸样本上的图谱进行比较，可以估算出样品的细菌含量。试剂纸方法快速准确，避免了计数法的人工操作误差。

十、益生菌检测膜过滤方法

使用特殊滤膜过滤一定体积的含细菌样品，用丫 - 叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发出橙色荧光，而死细胞则会发出绿色荧光。 

十一、益生菌检测氮含量的测定

对于干重，大多数细菌的氮含量为12.5％，酵母的氮含量为7.5％，霉菌的氮含量为6.0％。粗蛋白质含量可以基于6.25的氮含量来确定。有许多测定氮含量的方法，例如使用硫酸，高氯酸，碘酸，磷酸和Dumas N2气体法的消化方法。 Dumas通过将样品与CuO混合，在CO 2气流中加热以产生N 2，在呼吸计中收集它，并用KOH吸收CO 2来测量N 2的量来测量N 2气体方法。 

 十二、益生菌检测碳含量的测定

将少量（干重 0.2-2.0mg）生物材料混入1mL水或无机缓冲液中，并用2mL 2％K2Cr2O7溶液在100℃加热30min，然后冷却。可以通过用水稀释至5mL并读取波长为580nm的吸光度来估计生长量。试剂应用作空白对照，标准样品应用作标准曲线。 

十三、益生菌检测还原糖的测定

还原糖通常是指单糖或寡糖，其可以直接被微生物使用。还原糖的测定可间接反映微生物的生长，常用于微生物的大规模工业发酵生产。常规监测增长。该方法包括以下步骤：离心发酵液，取上清液，加入Feilin试剂，在沸水浴中煮沸3分钟，取少量盐酸酸化，加入淀粉溶液至终点。 Na2S2O3，继续添加Na2S2O3至终点，并查看表格以读取还原糖内容。

此外，许多生物制品公司采用传统的微生物检测方法原理，结合不同的检测方法，设计形式不同的微生物检测仪器和设备来对益生菌进行检测。但是随着技术的不断更新换代，商业快速微生物检测方法以其快速，准确，简单，自动化等特点，正迅速被益生菌检测所接受并推广。希望通过这篇文章，大家能对益生菌的检测方法有一个基本的认识。