花青素作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定营养和药理作用，在食品、化妆品、医药等方面有着巨大的应用潜力。

         自然界有超过300种不同的花青素。他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、黑枸杞、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡萝卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）。

1范围

　　本标准规定了植物源性食品中的飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵 色素共6种花青素的高效液相色谱测定方法。

　　本标准适用于植物源性食品中花青素含量的测定。

　　本标准的检出限:以称样量为1 g，定容体积为50 mL计，飞燕草色素、矢车菊色素、天竺奏色素、芍 药素和锦葵色素5种花青素的检出限均为0. 15 mg/kg;矮牵牛色素的检出限为0. 5 mg/kg。同样条件 下定量限:飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素5种花青素均为0. 5 mg/kg;矮牵 牛色素为1.5 mg/kg。

　　2规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6379. 1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义 GB/T 6379. 2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法

　　GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

　　3原理

　　植物源性食品中的花青素主要以花色苷的形式存在。试样经乙醇一水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴将花色苷水解成花青素，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。

　　4试剂和材料

　　除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T 6682规定的一级水。

　　4.1无水乙醇(C2H5OH):色谱纯。

　　4.2甲酸(CH2Oz):色谱纯。

　　4.3甲醇(CH3OH):色谱纯。

　　4.4盐酸(HCl):优级纯。

　　4.5提取液:无水乙醇+水+盐酸=2+l + l(V+V+V)，取200 mL无水乙醇、lOOmL水和lOOmL 盐酸混匀。

　　4.6 10%盐酸甲醇溶液(体积比)：取10 mL盐酸、90 mL甲醇混匀。

　　4.7 飞燕草色素(Delphinidin) : CAS 号 528 - 53 - 0，纯度≥96 %。

　　4. 8 矢车菊色素(Cyanidin) : CAS 号 528 - 58 - 5，纯度≥98 %。

　　4.9 矮牵牛色素(Petunidin chloride) :CAS 号 1429 - 30 - 7,纯度≥96%。

　　4.10天竺葵色素(Petunidin):CAS号134-04- 3，纯度≥96%。

　　4. 11 芍药素(Peonidin) :CAS号 134-01-0,纯度≥98%。

　　4. 12 锦葵色素(Malvidin) :CAS 号 643 - 84 - 5,纯度≥96%。

　　4.13单标储备溶液

　　分别准确称取飞燕草色素(Delphimdin)、矢车菊色素(Cyanidin)、矮牵牛色素(Petunidin chloride)、 天竺葵色素(Pelargomdin)、芍药素(Peonidm)和锦葵色素(Malvidin)共6种花青素标准品5. 0 mg，用 10%盐酸甲醇溶液(4. 6)溶解并分别定容至10 mL容量瓶中，即为500 mg/ L的单标储备液，于 -18°C 下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为6个月。

　　4.14 混合标准使用液

　　在使用中将单一标准储备液进行混合后，用10%盐酸甲醇溶液(4. 6)作为溶剂，并逐级稀释成 0.5mg/L、l. 0 mg/L、5. 0 mg/L、25. 0 mg/L、50. 0 mg/L或其他浓度的花青素混合标准使用液。在4℃条 件下，有效期为6个月。

　　4.15 滤膜:0.45 μm，水相滤膜。

　　5 仪器与设备

　　5.1高效液相色谱仪带

　　紫外或二极管阵列检测器。

　　5.2 天平:精度 0.01mg，0.01g。

　　5.3 水浴锅:精度±2℃。

　　5.4 匀浆机。

　　5.5 超声波清洗机。

　　5.6 粉碎机。

　　6 分析步骤

　　6.1 试样制备

　　采用四分法分取样品，含水率高的样品，如葡萄、茄子等，取约200 g于匀浆机中匀浆;含水率低的样品，如黑米、黑豆等，用粉碎机进行粉碎，过250 的筛。所有样品在 -18°C条件下保存。

　　6.2提取

　　根据样品中花青素含量，称取样品1.00g〜10.00g于50 mL具塞比色管中，加人提取液(4. 5)定容至刻度，摇匀1 min后，超声提取30 min。

　　6.3水解

　　超声提取后，于沸水浴中水解1 h，取出冷却后，用提取液a 5)再次定容。静置，取上清液，用0. 45 水相滤膜过滤，待测。样品制备好后，在4°C条件下，保存时间不超过3 d。

　　6.4测定

　　6.4.1 色谱参考条件

　　a) 色谱柱:C18柱,250 mm × 4. 6 mm × 5 μm或性能相当者;

　　b) 流动相A为含1 %甲酸水溶液，流动相B为含1%甲酸乙腈溶液;

　　c) 检测波长:530 nm;

　　d) 柱温:35°C;

　　e) 进样量:20 μL;

　　f) 梯度洗脱条件，见表1。

　　6.4.2色谱分析

　　分别将标准溶液和试样溶液，注人液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。色谱图参见附录A。

　　7 结果计算

　　样品中花青素含量为6种花青素含量之和。其含量以质量分数w计，单位为毫克每千克(mg/ kg)，按式⑴计算。

　　8 精密度

　　本标准精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6耵9. 2的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95%的置信度来计算。本标准方法的精密度数据参见附录B。

　　附录A

　　(资料性附录)