如何使用胶体金层析法快速检测乳制品中的三聚氰胺

很多时候,第三方检测机构在对乳制品中的三聚氰胺检测时,会采用大型专业检测仪器设备。这些设备通常采购费用较为昂贵,操作复杂。所以胶体金层析法以其快速、准确、方便、操作简单等优点,成为很多乳制品三聚氰胺的首选检测方法。

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如何使用胶体金层析法快速检测乳制品中的三聚氰胺综述

很多时候,第三方检测机构在对乳制品中的三聚氰胺检测时,会采用大型专业检测仪器设备。这些设备通常采购费用较为昂贵,操作复杂。所以胶体金层析法以其快速、准确、方便、操作简单等优点,成为很多乳制品三聚氰胺的首选检测方法。将胶体金免疫标记技术与层析技术结合起来的一种新型固相标记测定技术。目前主要通过胶体金免疫层析试纸来进行检测。

胶体金层析法

三聚氯胺抗原制备

三聚氯胺属于小分子化合物,其本身并没有免疫原性,所以我们需要先对三聚氯胺分子进行修饰,制备出与其结构类似的聚氯胺半抗原,即进行抗原设计。通过半抗原可制备免疫抗原和包被抗原。然后将制备出的免疫抗原注射入小鼠体内,经过一定时间,从体内提取,经过分离提纯后可得到三聚氰胺单克隆抗体,目前市面上已有针对不同物质的单克隆抗体,也可直接购买。

抗原制备

胶体金及金标抗体制备

采用氯金酸还原法制备胶体金,常用的还原剂为柠檬酸三钠。制备得到的胶体金需用紫外分光光度法和电镜鉴定其粒径,确定达到要求。将制备的胶体金溶液调节pH后,加入己经提纯过的王聚氯胺单克隆抗体,并添加封闭剂,经离心、沉淀、混悬等步驟最终制得金标抗体。

检测比较

试纸组装方法

将硝酸纤维素膜(简称NC膜)或玻璃纤维素膜包裹PVC底板,并组装滤纸和吸水垫,使用专口的点膜喷金设备将制备的包被抗原和购买所得羊抗鼠二抗,分别喷涂在NC膜检测线和质控线位置上,金标抗体加入到金标垫上,粘贴上样品垫即可得到试纸。试纸的检测方法如下图

 

参考图

T线和C线均显色明显为阴性,记为“-”。说明试样中待测物浓度小于试纸检出限;当T线颜色变淡为弱阳性,记为“-/+”。说明试样中待测物浓度约等于试纸检出限;当T线彻底消失为强阳性,记为"+",说明试样中待测物浓度高于试纸检出限。当C线不显色时,说明试纸失效,需更换试纸重新检测。

 

 

 

 

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