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哪些化妆品应该做透皮吸收试验?如何做?依据标准有哪些?_拜恩检测-专业第三方检测机构

发表时间:2021-08-24   来源:

透皮吸收试验是化妆品安全评估检测中的毒理试验之一。我国官方有关化妆品透皮吸收试验的标准规定或资料几乎为空白,然而很多企业在化妆品研发时,透皮吸收试验可能又是化妆品安全性评价程序需要进行的第一阶段试验。道理也很简单,化妆品必须经皮吸收以后才能发挥其功效作用,但是化妆品区别于药物,它的功效成分的透皮吸收不需要透过皮肤进入人体循环,只需要作用于皮肤表面或者是进入皮肤的表皮、真皮等不同皮肤层,之后在其部位积聚并发挥有效作用即可。所以如何保证化妆品皮肤吸收的安全定性或定量,也是做透皮吸收试验的意义所在。

化妆品吸收

如果你是化妆品研发企业,在化妆品备案或注册过程中,毒理学试验是必须提交的资料之一。但是哪些化妆品应该做透皮吸收试验?如何做?依据标准有哪些?相信都是很多化妆品公司疑惑的地方。透皮吸收试验有两大类一类是体外试验,一类体内试验,在官方资料不完善的情况下,如何选择官方认可的透皮吸收试验就成为企业急需了解的问题。大家也了解,化妆品安全检测报告必须要有理有据,即便没有针对性标准,参考相关标准也是可以的,那么透皮吸收试验应该依据哪个标准来做呢?下面我们就这些关键问题,为大家介绍一下。

 

哪些化妆品应该做透皮吸收试验?

这个问题的答案,其实在官方文件中还真有提到,不过只是“藏的有点深”。我们可以翻看,在最新的《化妆品安全评估技术导则(2021年版)》第五章节“毒理学研究”第11小节中,对“透皮吸收”做了明确说明,所以化妆品完全可以参考该章节的规定做透皮吸收试验。具体规定如下:

1.无原料和/或风险物质的透皮吸收试验,可采用国际通用的透皮吸收试验方法获取相应的数据。在透皮吸收数据时,吸收率以100%计;

 

2.若满足以下部分条件:分子量﹥500道尔顿,高度电离,脂水分配系数Log Pow≤-1或≥4,拓扑极性表面积>120Å2,熔点>200℃,吸收率以10%计;

 

3.若化学合成的由一种或一种以上结构单元,通过共价键链接,平均相对分子质量大于1000道尔顿,且相对分子质量小于1000道尔顿的低聚体含量少于10%,结构和性质稳定的聚合物(具有较高生物活性的原料除外),可不考虑透皮吸收。

 

4.吸收率不以100%计时,需提供有关情况说明。

 

总结来讲,功效宣称有保湿、美白、延缓衰老等的化妆品,需要建立在透皮吸收试验的基础上开展安全性评价程序。

保湿化妆品

 

做化妆品透皮吸收试验应该依据哪些标准?

化妆品透皮吸收试验分为体内试验和体外试验。体内试验一般是指通过测量化合物经尿液和排泄物排出体外的量来反映经皮吸收量。但是,实际操作中,体内实验受到许多因素的制约,如检

测方法的敏感度、伦理约束、化合物及其代谢产物的排出速率、个体差异等。因此,对于化妆品成份来说,体内试验没有实际应用价值。除非在必要时,如用于体内与体外方法的对比、特殊活性物质皮肤吸收的确认,可采用无毛的裸鼠进行体内研究。体内试验可参考GB/T 27825-2011 《化学品 皮肤吸收 体内试验方法》。

 

体外试验是化妆品透皮吸收试验的主流方法。检测方法主要有体外扩散池法、人工渗透膜和数学模型等,其中扩散池试验是评估化合物经皮通透性的最好的方法。简单来说,扩散池法就是将人或动物的离体皮肤安装在扩散池上,定时取接收液,用适宜的分析方法测定有效成分的含量,计算透皮速率来评价化学物的渗透特性。扩散池可分为静态扩散池和动态扩散池两大类,OECD化学物透皮吸收的体外方法测试指南适用于这两类扩散池模型。静态扩散池有Franz扩散池和Valia-Chien扩散池两种,其中Franz扩散池为垂直式扩散池,即皮肤模型将扩散装置分为上下两室(图2),此种扩散池最为常用。体外试验可参考GB/T 27818-2011《化学品 皮肤吸收 体外试验方法》。

猪皮动物皮肤

 

化妆品透皮吸收试验应该如何做?

参考GB/T 27818-2011《化学品 皮肤吸收 体外试验方法》。我们为一个要做透皮吸收试验客户,推荐了体外扩散池法。通常体外试验用的离体皮肤有动物皮肤、离体人皮肤以及三维重组皮肤模型几大类。不同种属、品系的动物,甚至同一动物不同解剖部位的皮肤结构均不相同,因此其皮肤通透性不同,各种属动物皮肤通透性顺序为:家兔>大鼠>豚鼠>小型猪>恒河猴>人。我们在大量化妆品透皮吸收试验研究中,在这些不同的动物皮肤中,猪皮肤的渗透性与人体皮肤最为接近,猪的皮肤厚度与人体皮肤厚度相似,且猪的体表面积大,可同时采集多个标本。猪角质层含有与人体角质层非常相似的蛋白质成分,其可变纤维密度、细胞重叠区域、真皮层胶原纤维、纤维束的结构、胶原纤维的厚度以及真皮层血管的数量、大小、分布都与人体皮肤十分相似,并且许多抗体在猪皮肤上也显示出了与人体皮肤相似的免疫活性。因此我们制定的方案就是使用巴马香猪的离体猪皮来进行。

 

Franz扩散池试验方案

 

1.实验耗材与试剂

1.1 仪器

紫外分光光度计;改进Franz扩散池(扩散面积4.52 cm2,接受室体积13 mL);超级恒温水浴装置及磁力搅拌器。

1.2 试剂

0.15%浓度RHC(重组胶原蛋白),PBS。

1.3 动物

实验用小型乳猪(巴马香猪,体重约7 kg)

 

2.实验方法与步骤

2.1离体猪皮的制备

巴马香猪处死后立即用电动剪毛刀剪去腹部皮肤毛,剥离去毛部位皮肤,去除皮下组织后用生理盐水冲洗干净,置于生理盐水中浸泡约30 min,取出,用滤纸吸干,备用。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取RHC对照品适量,置50 mL容量瓶中,加5 mL磷酸缓冲液进行溶解,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取2mL,置100mL量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,制成每1mL中含0.2mg的溶液,即为对照品溶液(RHC浓度为0.2mg/mL)。

2.2.2 样品溶液的制备(透皮性试验):取出储备猪皮,解冻,生理盐水洗净,将其夹在接受室和供给室之间,皮肤外层表皮朝向供给室,调整水温系统温度为32±1℃,搅拌速率为200 r/min,在接受室加入预温32±1℃的PBS溶液,将气泡全部排出,将猪皮内层表面与接受液接触,再将1mg /mL的RHC溶液注入供给室紧贴于猪皮表面,于0.5h、1h、2h、4h、12h后用注射器吸取接受液适量,孔径为0.45m的滤膜进行过滤,取滤液作为样品溶液。

2.2.3 空白基质液的制备:取空白基质适量,加入至注入室,0.5h、1h、2h、4h、12h后分别取接收液适量,孔径为0.45 m的滤膜进行过滤,取滤液作为空白基质液。

2.3 HPLC分析

分别取上述对照品溶液、样品溶液、空白基质液进行HPLC测定,波长范围220 nm。

 

3.实验结果与分析

通过对比对照品溶液、样品溶液、空白基质液经230 nm下HPLC检测是否存在吸收峰,判断重组胶原蛋白是否透过了皮肤。

试验

以上便是化妆品透皮试验最为详细的介绍。目前来讲,体外扩散池法以其诸多优点仍是目前最常用的获得化妆品功效成分经皮释放曲线,及其在不同皮肤结构中分布情况的检测方法。当然,除了该方法,类似胶带粘贴技术也可以用来测定角质层中化学物质含量,不过虽然该方法能很好地反映涂抹受试物局部皮肤的透皮吸收情况,但是缺点就是对志愿者的皮肤屏障有损伤作用。此外类似傅里叶变换衰减全反射红外光谱法、共聚焦拉曼显微镜和荧光寿命显微成像技术等无创、实时的检测技术也在化妆品透皮吸收方面的应用越来越广泛,但是这些检测设备通常较为昂贵,而且这些光谱测试方法对实验者要求较高,实验时一般要求测试部位长时间保持不能移动,具有一定挑战性。综上所述,体外扩散池法仍是化妆品透皮试验最好的选择。

 

 

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