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没毛病,a-氨基酸就得这么检测_拜恩检测-专业第三方检测机构

发表时间:2019-08-22   来源:

a-氨基酸不仅是蛋白质的最重要的组成成分,也是生物体中最重要的氨基酸,今天我们就a-氨基酸的检测方法-非水滴定法,详细的为大家介绍一下。非水滴定法主要就是针对α-氨基酸的氨基进行测定,当然也可以针对羧基来测定,如在二甲基甲酰胺等碱性溶剂中,以甲醇钾或季胺碱RNOH)等标准溶液来滴定,指示剂可选百里酚蓝,终点颜色由黄变蓝。

 

氨基酸

 

一、α-氨基酸检测原理

α-氨基酸的α位碳原子上连有氨基和羧基,故为两性物质,但在水溶液里两者离解趋势很小,溶液酸碱性均不明显(如氨基乙酸的羧基电离H+的Ka=2.5×10-10,氨基接收H+的Kb=2.2×10-12),故在水溶液中无法进行准确的滴定。但在非水介质中有可能被准确滴定。如在冰醋酸体系中,用HClO4的HAc溶液作滴定剂,结晶紫作指示剂,可准确滴定α-氨基酸。滴定后生成物为呈酸性的α-氨基酸的高氯酸盐。结晶紫在强酸性介质中为黄色,pH=2左右为蓝色,pH>3时为紫色,因而在此强酸滴定弱碱的反应中,一般选由紫色变为稳定的蓝绿色或蓝色为终点,若溶液呈现绿色或黄色则滴定过量,在确定终点时,可用电位计作参比。

 

若试样难溶于冰醋酸,可加入一定量甲酸作助溶剂,也可加入过量HClO4-冰醋酸,待样品溶解完全后用NaAc-冰醋酸返滴过量的HClO4。HClO4-冰醋酸滴定剂常用邻苯二甲酸氢钾作基准物质进行标定,反应为:

在标定中KClO4有可能被析出,但不影响标定结果

 

二、α-氨基酸检测仪器和试剂

1.仪器:3.000mL微型滴定管,50mL容量瓶,20mL锥形瓶,干燥小烧杯。

2.试剂:

(1)HClO4-冰醋酸(0.1mol/L):在低于25℃的250mL冰醋酸中缓慢边搅拌边加入2mL原装(70%~72%)HClO4,混匀后小心加入4mL乙酸酐,搅拌均匀,冷至室温,放置过夜使水分与乙酸酐反应完全。

(2)邻苯二甲酸氢钾基准物质:在105~110℃条件下干燥2h,在干燥器中用广口瓶保存备用。

(3)结晶紫(2g·L-1)冰醋酸溶液

(4)冰醋酸(A.R)

(5)乙酸酐(A.R)

(6)甲酸(A.R)

(7)α-氨基酸试样

 

三、α-氨基酸检测实验步骤

1.HClO4冰醋酸滴定剂的标定

准确称取0.5g左右KHC8H4O4于小烧杯中,加入30mL冰醋酸,溶解后定量转移至50mL容量瓶内,用冰醋酸稀释至刻度,摇匀。移取2mL于锥形瓶内,加1滴结晶紫指示剂,用HClO4-冰醋酸滴定至紫色转变为蓝绿色,即为终点,平行测定3~5份,各次相对偏差应≤±0.2%。

 

2.α-氨基酸含量测定

准确称取0.2g试样于小烧杯中,加入30mL冰醋酸、2mL乙酸酐与4mL甲酸,搅拌,若溶解度不高则可适量多加甲酸,待试样溶解后定量转移至50mL容量瓶中,用冰醋酸稀释至刻度,摇匀。移取5mL试液,加1滴结晶紫指示剂,用HClO4-冰醋酸滴至蓝绿色,即为终点,平行测定三次,计算α氨基酸的质量分数。

 

四、α-氨基酸检测注意事项

1.冰醋酸中的pH值定义与水中相同,但具体数值有区别,指示剂变色范围在HAc中与在水中有区别。 

2.乙酸酐可与水反应生成乙酸,脱去试液中的水分。

3.在非水体系中,甲基紫和结晶紫变化状态相同,可以用甲基紫代替结晶紫作指示剂。

4.冰醋酸在低于15℃时会凝固结冰,而液态冰醋酸体积受温度影响较大,故本实验适宜在天气较暖的春、秋季或有空调的房间内进行。

5.α-氨基酸可选乙氨酸(式量75.07)、丙氨酸(89.09)、谷氨酸(147.13)、异白氨酸(131.13)等易溶于冰醋酸的氨基酸。

6.在非水滴定中仪器必须干燥,否则会影响测定结果。

 

 

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