随着维生素的重要性日益凸显,各种食品中维生素的含量也成为了人们关心的问题,简单、快速又准确的维生素检测方法不仅能为食品营养评价和人们的健康膳食提供合理的建议,也是检测分析者研究的重要任务。目前,维生素的检测方法主要有:微生物检测法、光谱分析法、气相色谱法和高效液相色谱法。本文就各种维生素检测方法的应用现状做了简要的介绍。
维生素检测方法一:微生物检测法
微生物检测法,依照的是维生素是细菌生长的必要条件这一基本规律,利用酪乳酸杆菌的生长繁殖与培养基中叶酸含量成正比的关系,通过分光光度计以光密度测定细菌增殖的量,间接计算出样品中叶酸的含量。因此,微生物检测法也能够用于检测多种衍生物总和。在我国范围内,GB5413标准规范规定:在目前的技术条件下,测量叶酸、泛酸、维生素B12以及烟酰胺等的含量都可以利用微生物检测法进行确定。而在国际上,对叶酸的检测方法也是通过微生物检测法进行确定的。
维生素检测方法二:紫外分光光度法
紫外分光光度法是国际上使用的维生素测试方法,通常用于测量维生素A和维生素D等脂溶性维生素。对于维生素C,维生素B1和B2的测定,使用荧光分光光度法更为方便,经济。但是,这种方法受到很多因素的影响,实际应用过程复杂,需要很长时间。有相关学者提出连续小波变换 - 支持向量回归紫外分光光度法(CWT-SVR-UV)测定多组分B族维生素的含量,通过光谱CWT处理维生素混合样品,去除光谱背景信号,光谱重叠和通过CWTSVR-UV方法测量共线性的影响。维生素B1,维生素B2,维生素B3和维生素B6的相对组分分别测量为0.9%,1.8%,1.7%和0.5%。结果大大退了准确性,减少了检测时间。
维生素检测方法三:荧光法
荧光分光光度法,主要用氧化剂氧化维生素,然后与反应试剂反应形成含氮环缩合产物,并用荧光分光光度计测定含氮环缩合产物。因此,含量计算为维生素含量。维生素B1,维生素B2,维生素C和叶酸可以衍生化并转化为可发荧光的物质,从而可以测量荧光强度来确定维生素含量。
维生素检测方法四:气相色谱法
气相色谱法一般用于对维生素E进行测定,有学者建立了食品中4种维生素E异构体的气相色谱测定法。样品用石油醚-乙醚溶解,经KOH-甲醇皂化,用水洗涤除去干扰,经HP-5毛细管柱分离,氢火焰离子化检测器(FID)检测,内标法定量。该方法简便、快速、灵敏,30min内可完成α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚4种维生素E异构体的分析。可用于保健食品、食用植物油和坚果等食品中维生素E异构体含量的测定。
维生素检测方法五:高效液相色谱法
这种方法是当前被应用最为广泛的一种维生素检测方法,具有操作简便、灵敏度高、检出限低等特点,可用于脂溶性维生素:VA,VD,VE,VK和水溶性维生素:VC、VB、叶酸、泛酸等含量的测定。利用反相色谱柱,根据不同维生素的性质选择相应的流动相和梯度洗脱程序进行有效分离,所得结果重现性好,精密度高,加标回收率可达到85%~110%之间。但是反相色谱多以缓冲盐水溶液和甲醇作为流动相,这易造成脂溶性大分子化合物在柱内的沉淀,要经常清洗色谱柱,也可能使色谱峰形不理想,因此不同样品的前处理对色谱柱的保护和结果都极为重要。该方法不仅可以有效实现维生素的总量分析,还可实现维生素各个异构体的很好分离,另外还可同时对多种维生素进行有效分析,大大提高了检测效率,在维生素检测中具有广阔的应用前景。
维生素的多种类和结构特殊性一直是其检测技术攻关的难题,随着研究的逐渐深入,维生素检测的准确性有待进一步提高,而色谱与质谱联用的检测方法在准确分离定性的同时,更能对更微量的维生素进行准确测定,将成为该领域未来的发展方向。